Capitão América: Guerra Civil vai apresentar alguns heróis que não faziam parte do Universo Cinematográfico da Marvel, como o Pantera Negra e Homem-Aranha (cujos direitos no cinema estão atualmente com a Sony, diferente dos outros personagens da Marvel).
Porém, segundo Christopher Markus e Marcus McFeely, roteiristas do longa, declararam ao Collider, o Capitão América: Guerra Civil quase apresentou mais um herói, ou melhor: heroína.
Hope Van Dyne (Evangeline Lily) ganhou seu próprio uniforme de Vespa no final de Homem-Formiga, mas só deveria usá-lo em 2018, no filme Homem-Formiga e A Vespa. Por muito pouco não a veremos em Capitão América: Guerra Civil.
De acordo com Christopher Markus, "Sabe, quase todo mundo entrou. Houve um período no qual nós falamos sobre colocar a Vespa. Existiu um rascunho do qual a Vespa fez parte pois ela estava prestes a estar em 'Homem-Formiga', mas então você estaria tirando algo incrível da equipe do Homem-Formiga se dissesse 'Vamos incluí-la!'. Além disso, ela tinha habilidades similares, então foi meio 'Bem, talvez só devêssemos isolar tudo no Scott'."
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No longa, Capitão América/Steve Rogers (Chris Evans) entra em conflito com Homem de Ferro/Tony Stark (Robert Downey Jr.) por discordar da ideia de que o governo controle os heróis, já que os atos deles podem afetar toda a humanidade.
Duas frentes de combate se formam e heróis como Viúva Negra (Scarlett Johansson), Soldado Invernal (Sebastian Stan), Feiticeira Escarlate (Elizabeth Olsen), Visão (Paul Bettany), Falcão (Anthony Mackie), Pantera Negra (Chadwick Boseman) e Máquina de Combate (Don Cheadle) se dividem em duas facções.
Capitão América: Guerra Civil estreia em 28 de abril de 2016.